Cell Analysis

Autophagy Detection 自噬作用偵測試劑

DALGreen__|__DAPGreen
DALGreen還是DAPGreen,要如何作選擇?
  • DALGreen-針對自體溶酶體(Autolysosome)的偵測。
  • DAPGreen-從自噬小體(Autophagosome)的形成到自體溶酶體(Autolysosome)都可以偵測到。

請依據您的實驗設備來選擇最適合的實驗方法。
 

DALGreen
Dojindo的DALGreen為一個可穿透細胞膜的綠色螢光染劑(λex : 405 nm/ λem : 525 nm)。它具有可在疏水(hydrophobic)及酸性條件下發出螢光的特性,因此可被用來來偵測自體溶酶體(Autolysosomes)。可用於螢光顯微鏡的活細胞影像觀測或用於流式細胞儀進行定量分析。  

在自噬作用的過程中,當自噬小體(Autophagosome)形成時DALGreen會嵌入膜中,當自噬小體和溶酶體(Lysosome)結合後形成自體溶酶體(Autolysosome)後,自體溶酶體內的酸性環境會使DALGreen發出強烈的綠色螢光。

 
驗步驟
不需轉染,僅需將DALGreen試劑添加至培養的細胞中,即可得到螢光影像。

 
  • 可以使用即時影像(Real time image)的方式監測自噬作用(Autophage)
HeLa細胞染完DALGreen後,在飢餓條件下以縮時影像觀測六小時。  >>觀賞影片
  • 可以偵測活細胞內的自體溶酶體(Autolysosome)
  • 操作步驟非常簡易,只需將DALGreen染劑加入待測細胞培養基中。

Assay Data
  • 使用共軛焦顯微鏡觀察螢光 (Observation on Confocal Fluorescence Microscopy)
HeLa細胞加入DALGreen後,培養於生長培養基(A)或無氨基酸培養基(B)六小時後,以共軛焦顯微鏡觀察螢光分佈情形。在飢餓處理的HeLa細胞中可以觀察到強烈的點狀DALGreen螢光訊號。
  • 使用流式細胞儀分析 (Analysis by Flow Cytometry)
HeLa細胞加入DALGreen後,培養於生長培養基(a)或無氨基酸培養基(b)20小時後,使用流式細胞儀觀察DALGreen的螢光訊號。在飢餓處理的組別,可被偵測到強烈的DALGreen螢光。

 
購資訊 
 
Cat# Product Name Unit
D675 DALGreen-Autophagy Detection 20 nmol
 
DAPGreen
Dojindo的DAPGreen為一個可穿透細胞膜的綠色螢光染劑(Ex : 425-475 nm/ Em : 500-560 nm)。它具有可在在親脂性(lipophlic)條下發出螢光的特性,因此可被用來來偵測自噬小體(Autophagosome)的形成。可用於螢光顯微鏡的活細胞影像觀測或用於流式細胞儀進行定量分析。


在自噬作用的過程中,當自噬小體(Autophagosome)形成時DAPGreen會嵌入膜中,嵌入的DAPGreen會在親脂性(lipophlic)條件下增強螢光。

驗步驟
不需轉染,僅需將DALGreen試劑添加至培養的細胞中,即可得到螢光影像。

  • 可以使用盤式分析儀(plate reader)進行定量分析(Quantitative Analysis)
在染完DAPGreen後,HeLa細胞使用無氨基酸培養基培養0, 2, 4, 6 hrs,​接著使用盤式分析儀(microplate reader)分析DAPGreen螢光結果。細胞使用飢餓條件培養2 hrs後,可被觀察到增強的DAPGreen螢光訊號。訊號強度約比控制組高3.5倍。
  • 與知名的自噬作用(Autophagy)標記(Marker)「LC3」具結果相關性
使用DAPGreen和tagRFP-LC3對HeLa細胞進行雙重染色,確認兩者是否座落於相同位置。將DAPGreen加至可表現RFP-LC3的Hela細胞後,細胞接著處理rapamycin,以誘發細胞自噬。細胞自噬誘發處理四小時後,使用共軛焦顯微鏡(confocal microscopy)觀察螢光影像。結果顯示,幾乎所有的DAPGreen皆與LC3-II座落於相同位置。
  • 不需要進行轉染(Transfection),只要加入DAPGreen染劑,就可以偵測自噬小體(Autophagosome)

Assay Data
  • 使用共軛焦顯微鏡觀察螢光 (Observation on Confocal Fluorescence Microscopy)
HeLa細胞加入DAPGreen後,培養於生長培養基(A)或無氨基酸培養基(B)五小時後,以共軛焦顯微鏡觀察螢光分佈情形。在飢餓處理的HeLa細胞中可以觀察到強烈的點狀DAPGreen螢光訊號。
  • 使用流式細胞儀分析 (Analysis by Flow Cytometry)
HeLa細胞加入DAPGreen後,培養於生長培養基(a)或無氨基酸培養基(b)三小時後,使用流式細胞儀觀察DAPGreen的螢光訊號。在飢餓處理的組別,可被偵測到強烈的DALGreen螢光。

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Cat# Product Name Unit
D676 DAPGreen-Autophagy Detection 5 nmol