RNAi

miRNA Solutions

miRNA 解決方案

Genecopoeia
NCBI推薦的基因clone供應商!​

miExpress™ miRNA Precursor Clones  |  miTarget™ 3’UTR miRNA Target Clones  |  miArrest™ miRNA Inhibitors  |  miRNA定量分析相關試劑





 
MicroRNAs (miRNAs)是一個長度約21-23 nucleotide所組成的一個單股RNA序列,屬於非編碼的小片段RNA,是細胞生理途徑中的重要調控者,並且在真核生物體中為高度保守(highly conserved)。miRNA經由target到3'URT引起mRNA轉譯或mRNA降解來調控基因的表達。miRNA所調控基因的表達失調已被發現與癌症、心血管疾病和多種其他疾病有關。
 

miExpress™ miRNA Precursor Clones


 
miExpress™ miRNA Precursor Clones可以使細胞過度表達miRNA,抑制目標mRNA的表達,從而抑制蛋白質的轉譯。miRNA與3' UTR target序列結合後有兩種方式可以抑制mRNA的表達,第一種為抑制mRNA的轉譯進而抑制蛋白質的產生,第二種為藉由降解mRNA而去抑制蛋白質的產生。

應用

過度表達miRNA進行功能性研究

特點

  • 涵蓋目前miRBase數據庫上所有已知人類、小鼠及大鼠的miRNA
  • 提供兩種載體 : 慢病毒載體-進行有效轉導並將基因序列穩定整合到宿主基因組中; 非病毒載體-進行transient transfection
  • Expression cassettes經過完整的定序及優化,實現了precursor miRNA和細胞內成熟miRNA的高表達量

載體選擇 

Vector Tracking gene Selection marker Promoter Type
pEZX-MR02 mCherry Puromycin CMV HIV
pEZX-MR03 eGFP Puromycin CMV HIV
pEZX-MR04 eGFP Puromycin CMV Mammalian
 

 

miTarget™ 3’  UTR miRNA Target Clones

特別使用外泌型Gaussia luciferase (GLuc),此螢光素酶的眾多優點好處
  • 活細胞分析—無需裂解細胞,只需收培養基即可分析
  • 高靈敏度—GLuc的靈敏度比firefly 或 Renilla luciferase高一千倍
  • 非常適合時間點及高通量實驗
miTarget™ 3′ UTR miRNA Target Clones 將miRNA目標基因的3' UTR基因序列插入在firefly luciferase (Fluc) 或Gaussia luciferase (GLuc) 螢光素酶下游處,由上游啟動子SV40驅動此段基因的轉錄。當miRNA辨認到3' UTR序列並抑制Fluc- 或 GLuc-3' UTR的轉譯,螢光素酶的表達受到抑制。藉由偵測螢光素酶的活性,可以得知目標基因是否有被miRNA調控。

應用

miRNA target驗證、預測目標miRNA target site 的功能和miRNA對target gene調節作用的研究

特點

  • 涵蓋人類、小鼠和大鼠基因組
  • 使用雙報告載體系統,可以標準化轉染效率,實現精確的跨樣本比較
  • 雙報告載體系統採用分泌型的Gaussia lucferase(GLuc)或 Firefly luciferase (Fluc) 報告基因用於檢測miRNA調控作用,以SEAP或Renilla luciferase報告基因作為信號標準化的internal control
  • 簡單的定量方法
 
Vector Reporter gene Tracking gene 特點 搭配分析套組
pEZX-MT05 Gaussia luciferase Secreted alkaline
phosphatase (SEAP)
不需要裂解細胞,利
用上清液進行活細胞分析
Secrete-Pair™ Dual
Luminescence Assay Kit
pEZX-MT06 Firefly luciferase Renilla luciferase 分析前需將細胞裂解 Luc-Pair™ Luciferase Assay Kit



mir-125a將來自GLuc-LIN28-3'-UTR clone的螢光素酶活性抑制超過70%

LIN28為已知的miR-125a目標基因,將GLuc-LIN28-3'-UTR clone轉染到HEK293細胞,轉染(transfection)後24小時,偵測GLuc和SEAP的活性。將只轉染LIN28 3'-UTR target sequence expression clone的GLuc和SEAP的活性比設定為1,作為標準化的基準。
 





 


  特別推薦  

分析套組

Gaussia Luciferase ( GLuc ) / Secreted Alkaline Phosphatase (SEAP)
報告基因系統分析套組

專門設計用於分析使用Gaussia Luciferase( GLuc )和Secreted Alkaline Phosphatase(SEAP)的雙報告系統實驗或使用GLuc的單報告基因系統實驗。
 
  • 活細胞分析 — 僅須收取培養液,適合時間點及高通量實驗
  • 靈活運用 — 套組內附有兩種不同條件緩衝液(高靈敏度和高穩定度)
  • 相容性高 — 可用於分析所有GCP所提供、帶有GLuc和SEAP的clone
 
Cat. No. Product Description Size
LF031 Secrete-Pair Dual Luminescence Assay Kit
(100 rxns)

Detects Gaussia luciferase (GLuc)
and secreted alkaline phosphatase
(SEAP)

100 rxns
LF032 Secrete-Pair Dual Luminescence Assay Kit
(300 rxns)
300 rxns
LF033 Secrete-Pair Gaussia Luciferase Assay Kit
(100 rxns)
Detects Gaussia luciferase (GLuc) 100 rxns


Firefly Luciferase / Renilla Luciferase報告基因系統分析套組

三個不同特色的高品質Firefly Luciferase / Renilla Luciferase報告基因系統分析套組,您可依照實驗需求選擇最適合的分析套組:

Luciferase表現量很低?-試試高靈敏度的Luc-Pair™ Duo-Luciferase HS Assay Kit
冷光訊號掉得太快?-試試高穩定度的Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit 2.0
樣品數量很多?-試試縮減操作步驟的Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit HT
 
Cat. No. Product Description Size
LF004 Luc-Pair™ Duo-Luciferase HS Assay Kit
(100rxns)

For high sensitivity detection of Firefly
and Renilla luciferase activities.

100 rxns
LF005 Luc-Pair™ Duo-Luciferase HS Assay Kit
(300rxns)
300 rxns
LF001 Luc-Pair Duo-Luciferase Assay Kits 2.0
(100rxns)
For enhanced stability detection of Firefly
and Renilla luciferase activities.
100 rxns
LF002 Luc-Pair Duo-Luciferase Assay Kits 2.0
(300rxns)
300 rxns
LF013 Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit
(10 ml)
For high-throughput detection of Firefly
and Renilla luciferase activities.
10ml
LF014 Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit
(30 ml)
30ml
 

miArrest™ miRNA Inhibitors


 
當miRNA inhibitor construct被轉導或轉染進入細胞後,轉錄出的miRNA inhibitor會再經過轉錄後修飾(post-transcription)形成一個可以捕獲miRNA的結構,此結構可以和兩個成熟的單股miRNA進行特異性結合,阻止內生性miRNA與目標mRNA的結合,從而抑制miRNA對目標基因的調控,並且增強目標基因的表達。

應用

抑制miRNA以進行功能缺失(loss of function)的研究


miArrest™ miRNA Inhibitor Expression Clones

特點

  • 涵蓋目前miRBase數據庫上所有已知人類、小鼠及大鼠的miRNA
  • 有兩種載體可供選擇:慢病毒載體和非病毒載體
  • 載體上的promoter有H1以及U6兩種選擇,能夠在幾乎所有類型的哺乳類細胞中使miRNA Inhibitor被穩定持續地表達
  • 與其他化學合成的miRNA Inhibitor相比,具有優異的效力、持久的抑制作用和極低的細胞毒性


產品比較

  Vector-Based
Inhibitors
Synthetic 2'-OMe
Inhibitors
Inhibition +++++ ++
Specificity +++++ +++
Stability +++++ +
Durability Long term Transient
Cell Toxicity - -
Delivery to resting and hard-to-transfect cells +++++ -


載體選擇

Vector Reporter
gene
Selection
marker
Promoter Type
pEZX-AM01 mCherry Puromycin H1 Mammalian
pEZX-AM02 mCherry Puromycin U6 Mammalian
pEZX-AM03 mCherry Hygromycin H1 HIV
pEZX-AM04 mCherry Hygromycin U6 HIV
pEZX-AM04p mCherry Puromycin U6 HIV


mir-125a將來自Gluc-LIN28-3'-UTR clone的螢光素酶活性抑制超過70%(左2)。將miArrest™ inhibitor clone轉導入細胞後可以阻斷miR-125a對目標基因的抑制作用。使用劑量越高阻斷效果越好。在最高劑量下(100 ng),GLuc活性已高於對照組,此現象可歸因於vector-based inhibitor可能已經阻斷內生性miR-125a的調控作用,導致GLuc-LIN28-3'-UTR transcript的轉譯活性增加。





 

  特別推薦  

miArrest™ miRNA Inhibitor Expression Clones

GeneCopoeia亦提供化學合成的miRNA Inhibitor,可以進行轉染,用以抑制特定的內生性miRNA。
 

miRNA定量分析相關試劑

All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit

檢測及定量miRNA
Kit內包括RT和qPCR兩部分試劑。利用基於SYBR® Green的qPCR技術,對miRNA進行快速、準確的定量。

特點

  • 能從少至10 pg small RNA或 20 pg total RNA的樣品中檢測miRNA
  • 僅會檢測成熟單股的miRNA
  • 可與All-in-One miRNA qPCR Primer配套使用


實驗步驟重點

3' polyadenylation期間,M-MLV RTase和一個獨特的Adaptor primer反向轉錄poly A miRNAs。試劑盒中的qRT-PCR Mix含有SYBR® Green染劑,用於檢測反轉錄形成的miRNAs。








 

All-in-One™ miRNA qPCR Primers

使用在qPCR,為具特異性的miRNA primer
每條All-in-One™ miRNA primer均使用專利演算法設計並經過實驗驗證。和All-in-One™ miRNA qRT-PCR Kit配套使用,可以使實驗結果更可靠、再現性更好。


特點

  • 每條primer均附有miRNA qPCR primer validation report
  • 附positive Control cDNA Mix

經過驗證的All-in-One™ miRNA qPCR primer對靶標miRNA進行特異性擴增並產生特異的溶解曲線。曲線有良好的一致性。





 
Cat. No. Product Description Size
QP015 All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit*

Poly A Polymerase, RTase Mix, qPCR Mix, ROX Reference Dye, Universal Adaptor PCR Primer and other buffers (for use with miRNA qPCR primers)

20 RT and 200 qPCR rxns
QP016 All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit* Poly A Polymerase, RTase Mix, qPCR Mix, ROX Reference Dye, Universal Adaptor PCR Primer and other buffers (for use with miRNA qPCR primers) 60 RT and 600 qPCR rxns
多種 All-in-One miRNA qPCR Primer 驗證過人類、小鼠和大鼠miRNA primers 200 rxns
 

miRNA clones (GeneCopoeia)
       Precursor miRNA Expression Clones
       3'UTR miRNA Target Clones
       miRNA Inhibitor Clones & Mimics 

miRNA Viral Transduction
       miRNA adeno-associated viral particles (SignaGen)
       miRNA Lentiviral Particles (GeneCopoeia)

miRNA qRT-PCR Reagent Kits and Validated Primers (GeneCopoeia)
       All-in-One™ miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit
       All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit
       All-in-One miRNA qPCR Primer 

miRNA qPCR arrays (GeneCopoeia)
       miRNA qPCR Arrays
       miRNA Cancer qPCR Arrays
       miRNA Disease & Focus-group qPCR Arrays
       miRNA miRNome miRNA qPCR Arrays
       miProfile™ Custom miRNA qPCR Arrays