Cell Analysis

Cell Apoptosis Assay | 細胞凋亡檢測

Annexin V binding assays__|__JC-1 MitoMP Detection Kit
細胞凋亡(Apoptosis)是指細胞為維持細胞內環境穩定,由基因控制的細胞自主性有序的死亡。 在細胞凋亡發生期間,細胞膜、線粒體、細胞質及細胞核都發生了不同程度的變化,這些變化都可以作為評估細胞凋亡的依據。在凋亡發生的最初時期,細胞膜上的磷脂醯絲氨酸(phosphatidylserine,PS) 由細胞膜內側外翻至細胞膜外表面。接著線粒體隨著其膜電位的改變開始去功能化,釋放出一些線粒體蛋白,如細胞色素C(Cytochrome c)和Smac蛋白,由此導致了下游的caspase啟動和DNA的片段化發生。
 


  Annexin V binding assays  

Genecopoeia
提供Annexin V binding assays,用於偵測細胞凋亡早期。

annexin V是35–36 kilodalton, Ca2+ -dependent磷脂結合蛋白,其對磷脂醯絲氨酸(phosphatidylserine,PS)具有高親和力。 在正常存活的細胞中,PS位於細胞質內的細胞膜表面。在凋亡早期,細胞PS從質膜的內部轉移到外部,使PS暴露細胞外部環境,可通過annexin V conjugate檢測暴露於細胞外的PS。更多詳情>>


eGFP Annexin V and PI Apoptosis Kit
FITC Annexin V and PI Apoptosis Kit
Andy Fluor™ 488 Annexin V and PI Apoptosis Kit
Apoptotic, Necrotic, and Healthy Cells Detection Kit
Annexin V Conjugates

  JC-1 MitoMP Detection Kit  |  粒線體膜電位檢測  


DOJINDO
此試劑盒含有JC-1染料和分析緩衝液,用於偵測細胞凋亡中期之粒線體膜電位失衡現象。

為什麼會出現粒線體膜電位變化?

粒線體是早期細胞毒性、氧化壓力和細胞凋亡的重要胞器之一。粒線體使用氧氣合成ATP,為活細胞產生必需的能量。已知粒線體的活性降低和功能障礙、癌症、衰老和神經退化性疾病例如阿茲海默症與帕金森氏症密切相關。
JC-1被廣泛用於觀察粒線體膜電位,根據粒線體膜電位不同,會顯示從綠色(530 nm)到紅色(590 nm)的螢光特徵變化。

偵測原理
在膜電位正常的健康粒線體中,JC-1以多聚體(polymer)形式存在,並且發出紅色螢光。當粒線體膜電位降低時,JC-1會變成單體(monomer),並且發出綠色螢光。紅色/綠色螢光強度比可當作評估粒線體狀況的指標。
 
 

第一次使用就上手

解決傳統JC-1難以溶解的問題 - 此試劑盒中的JC-1為水溶性,易溶解


兼容多樣化平台 - 兼容流式細胞儀、螢光顯微鏡以及盤式分析儀,提供每種平台的實驗範例



附有影像緩衝液(Imaging Buffer) - 含有HEPES,可在分析過程中長時間維持細胞最佳狀態,並且可降低螢光背景

 

以螢光顯微鏡檢測FCCP處理後的HeLa細胞粒線體膜電位

使用carbonylcyanide-р-trifluoromethoxyphenylhydrazone(FCCP)處理HeLa細胞,使粒線體膜去極化,並用此試劑盒評估膜電位的變化。以螢光顯微鏡檢測結果顯示,未處理的細胞中粒線體染色為紅色,而用FCCP處理的細胞顯示粒線體膜電位降低,紅色螢光減少。

以螢光顯微鏡檢測FCCP處理後的HeLa細胞粒線體膜電位。
FCCP: 去極化試劑,使粒線體膜電位降低。
實驗條件​
JC-1 濃度:2 μmol/l in MEM,  染色時間:30 min
FCCP 濃度:100 μmol/l, FCCP 處理時間:1 h
偵測條件
Green:Ex 488 nm / Em 500-550 nm 
Red:Ex 561 nm / Em 560-610 nm
Scale Bar : 20 μm
 

簡易實驗操作步驟

只需在細胞中加入染色試劑,即可經由簡單的操作進行染色。以JC-1 working solution孵育細胞30分鐘後,利用各種偵測平台檢測結果。


 

檢測誘導凋亡Jurkat細胞的粒線體膜電位

  1. 用Staurosporine誘導Jurkat細胞凋亡
  2. 以JC-1 working solution孵育細胞30分鐘
  3. 以螢光顯微鏡觀察細胞,並使用plate reader以及流式細胞儀進行分析

螢光顯微鏡細胞影像

通過清楚地成像,可見到因凋亡誘導而改變的膜電位的顏色變化



偵測條件
Green:Ex 488 nm / Em 500-550 nm 
Red:Ex 561 nm / Em 560-610 nm
Scale Bar : 80 μm
 

微量盤式分析儀分析結果

確認well中所有細胞的膜電位變化(多個樣本處理)





偵測條件
Green:Ex 488 nm / Em 515-545 nm
Red:Ex 488 nm / Em 564-604 nm

 

流式細胞儀分析結果

定量分析個體細胞膜電位的變化






偵測條件
Green:Ex 485 nm / Em 525-545 nm
Red:Ex 535 nm / Em 585-605 nm
 

Kit可用分析次數

螢光顯微鏡 流式細胞儀 Plate Reader
25 dishes
(35 mm dish)
100次 5 plates 
(96-well plate)
※使用2 µmol/l JC-1 working solution

產品資訊

Cat. No. Product Size
MT09 JC-1 MitoMP Detection Kit 1 set