Cell Analysis

Cytotoxicity Assay Live/Dead

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Cytotoxicity  LDH Assay Kit-WST 細胞毒性分析套組

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST為一組利用偵測破損細胞中釋放出的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase、LDH)活性以得知細胞毒性(cytotoxicity)的96-well比色法套組。
   

LDH為穩定的胞質酵素,可在所有不同型態的細胞中被發現,在細胞細胞膜破損後,LDH會被釋放到細胞培養基中。Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST可依下圖所示來偵測被釋放出的LDH活性。首先,LDH會催化乳酸(lactate)脫氫成丙酮酸(pyruvate)並伴隨著NAD+還原成NADH。接著,在電子傳遞者(electron mediator)的幫助下,NADH會將水溶性的tetrazolium salt (WST)還原成橘色的formazan。因formazan的量跟破損細胞所釋放出的LDH成正比,因此formazan的吸光值即可指示有多少破損細胞。​


驗步驟

析方法
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST具彈性的操作選擇。您可使用一步法(homogeneous assay)或低損傷法(non-homogeneous assay)來進行細胞毒性分析。

  • 無需準備其他試劑
  • 試劑穩定性高
Working Solution配製好後可冷藏六個月
  • 結果相關性好
和P公司與R公司相比,Dojindo套組所偵測到的LDH含量與呈色試劑吸光值呈現更為良好的線性關係。
  • 檢測方法彈性
Dojindo產品可以彈性選擇一步法或者低損傷法。

Assay Data
實際使用Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST分析補體依賴的細胞毒性作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)

實驗方法
細胞株: RAJI cell (Burkitt’s lymphoma, human)
培養基: serum-free RPMI1640 with 5% complement
孔盤: 96-well flat-bottom microplate, tissue culture grade
抗體: anti-CD 20 antibody
反應液: 依照操作手冊指示配製
 
  1. 準備40 x 104 cells/ml於培養基中的細胞懸浮液。
  2. 每個well中加入50 μl 的細胞懸浮液。
  3. 使用培養基配製不同濃度的抗體,每個well中加入50 μl的抗體溶液。建議做三重覆。
  4. 將孔盤置於37oC CO2培養箱中培養2小時。
  5. 每個well中加入100 μl 的反應液,在室溫下培育15分鐘。
  6. 每個well中加入50 μl 的反應終止液,使用讀盤儀測量OD 490 nm讀值。

結果顯示當anti-CD20 antibody的量上升時,細胞培養基中LDH的活性跟著增加,由此可知anti-CD20 antibody觸發了補體系統(complement system),造成細胞損傷,進而導致LDH從破損細胞中被釋放出來。

購資訊
 
Product Code# Unit Size
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST CK12-01 100 tests
CK12-05 500 tests
CK12-20 2000 tests


 

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 
細胞活性/毒性評估指標試劑盒

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit內含兩種分析套組CCK-8 kit & LDH Assay kit,分別可用在活細胞測定與死細胞測定。CCK-8 + LDH Assay = 更精確地評估細胞狀態 !
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使用兩個指標評估細胞活性與毒性的原因

目前常用於細胞毒性/存活率的分析方法,諸如 MTT、MTS、CCK-8等,皆是利用偵測細胞的代謝活性來反應細胞存活率,因此無法分辨出細胞毒性的造成是因為活細胞數量減少或是代謝活性降低。反之,LDH Assay利用偵測細胞破損後釋放於培養基中的乳酸脫氫酶來反應細胞的死亡率,僅會偵測到死亡細胞。
透過使用不同測量原理的多個指數進行評估,可以互相驗證,綜合評估細胞毒性,確認實驗結果。
 
CCK-8 & LDH Assay Kit 比色法偵測原理

CCK-8:
使用高度水溶性tetrazolium salt-WST-8,可因活細胞內的脫氫酶(dehydrogenase)活性而被還原成可溶於培養基中的水溶性橘黃色產物(WST-8 formazan)。因WST-8 formazan的產量取決於細胞內脫氫酶的活性,因而可直接反映存活細胞的數量(活細胞越多,顏色越深)。
LDH Assay Kit:
偵測破損細胞中釋放出的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH),LDH會催化乳酸(lactate)脫氫成丙酮酸(pyruvate)並伴隨著NAD+還原成NADH。接著,在電子傳遞者(electron mediator)的幫助下,NADH會將水溶性的tetrazolium salt (WST)還原成橘色的formazan。因formazan的量跟破損細胞所釋放出的LDH成正比,因此formazan的吸光值即可反映破損細胞數量(死細胞越多,顏色越深)。


 
使用相同的細胞樣本即可進行評估
LDH Assay Kit可以直接添加到含有細胞的培養基中檢測 (一步法)。也可以先取出細胞培養基上清液,加到上清液中檢測 (低損傷法),分離的細胞可以做其它實驗。
低損傷法,可以使用相同的細胞樣本進行兩種測試,增加細胞毒性判斷準確性,節省時間和精力。






 
配使用CCK-8 & LDH Assay Kit進行細胞毒性評估的參考文獻

購資訊
Cat# Product 內容物
CK17 Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
細胞活性/毒性評估指標試劑盒
Cell Counting Kit-8, 500 tests +
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST, 500 tests


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